96 Ensaios Kit de ensaio ELISA para detecção de kanamicina de elevada reprodutibilidade

Kit de ensaio ELISA da canaamicina

Descrição do produto

REAGEN^TMO kit de ensaio ELISA da canamicina é um ensaio imunológico enzimático competitivo para a análise quantitativa da canamicina na carne/ fígado/ rim, no lisato celular, na urina, no soro e no leite.

As características únicas do kit são:

• Métodos de extracção de alta recuperação (> 80%), rápidos (10-40 minutos) e rentáveis.

• O limite de detecção é de 0,2 ng/g.

• Alta reprodutibilidade.

• Um ensaio ELISA rápido (menos de 1 hora, independentemente do número de amostras).

Resumo do procedimento

O método baseia-se num ensaio ELISA colorimétrico competitivo.A amostra e o anticorpo de kanamicina (anticorpo n.o 1) e o HRP-conjugado (anticorpo n.o 2 conjugado com HRP) são adicionados aos poços para incubação.Se o resíduo de kanamicina estiver presente na amostra, ele competirá com a kanamicina nos poços das placas para o anticorpo de kanamicina, o anticorpo secundário, marcado com uma enzima peroxidase,Destina-se ao anticorpo primário que é complexo para a droga revestida nos poços da placaA intensidade de cor resultante, após adição do substrato HRP (TMB), tem uma relação inversa com a concentração de resíduos de kanamicina na amostra.

Conteúdo do kit, armazenagem e prazo de validade

REAGEN^TMO kit de ensaio ELISA de kanamicina tem capacidade para 96 determinações ou testes de 42 amostras duplicadas (assumindo 12 poços para padrões).Devolver os micro-cavidades não utilizados para o saco de papel alumínio e re-selar com o dessecante fornecido na embalagem original. Armazenar o kit a 2- 8°C.* O prazo de validade é de 12 meses quando o kit for conservado adequadamente.

Se não pretender utilizar o kit durante mais de 1 mês, conserve a Kanamicina Standard Stock, o Anticorpo Kanamicina #1 e o Anticorpo HRP- Conjugado #2 a - 20°C ou num congelador.

Sensibilidade (Limite de detecção)

Especificidade (reatividade cruzada)

Materiais necessários não fornecidos com o kit

• Leitor de placas de microtiter (450 nm)

• Mixer de tecidos (por exemplo, Omni Tissue Master Homogenizer)

• Misturador de vórtice (por exemplo, misturador de vórtice Genie da VWR)

• 10, 20, 100 e 1000 IU de pipetas

• Pipeta multicanal: 50-300 L (opcional)

Advertências e precauções

• Os padrões contêm Kanamicina.
• Não utilize o kit após a data de validade.
• Não misture reagentes de kits ou lotes diferentes, exceto para componentes com o mesmo número de peça dentro das datas de validade.
• Tente manter uma temperatura de laboratório de 20° 25° C (68° 77° F). Evite conduzir testes sob ou perto de aberturas de ar, pois isso pode causar resfriamento, aquecimento e/ou evaporação excessivos.Não execute ensaios à luz solar direta, uma vez que isto pode causar calor e evaporação excessivos.Os bancos frios devem ser evitados colocando várias camadas de toalha de papel ou outro material isolante sob as placas de ensaio durante a incubação..
• Certifique-se de utilizar apenas água destilada ou desionizada, uma vez que a qualidade da água é muito importante.
• Ao pipetar amostras ou reagentes numa placa de microtiter vazia, colocar as pontas da pipeta no canto inferior do poço, em contacto com o plástico.
• As incubações das placas de ensaio devem ser cronometradas com a maior precisão possível.
• Adicionar padrões à placa apenas na ordem de baixa concentração para alta concentração, pois isso minimizará o risco de comprometer a curva padrão.
• Manter sempre as placas refrigeradas em sacos selados com um dessecante para manter a estabilidade.Prevenir a formação de condensação nas placas, permitindo-lhes equilibrar- se à temperatura ambiente (20°C / 68°F) enquanto estão na embalagem.

Certifique-se de que as amostras são armazenadas adequadamente. Em geral, as amostras devem ser refrigeradas a 2-4°C durante não mais de 1-2 dias. Congelar as amostras a um mínimo de -20°C se precisar de serem armazenadas por um período mais longo.As amostras congeladas podem ser descongeladas a temperatura ambiente (20 25 ° C / 68 77 ° F) ou numa geladeira antes de serem utilizadas.

• Preparação de 1 × diluente da amostra:Misturar 1 volume de 10 × diluente da amostra com 9 volumes de água destilada.
• Preparação 1 ×Amostragem Ext. tampão: Misturar 1 volume de tampão de 10 × Amostra Ext. com 9 volumes de água destilada.

Lisato de célula

• Tomar 100 I.L. de lisato celular, adicionar 900 I.L. de tampão diluente de 1 × amostra, misturar bem.

• Centrifugar durante 5 minutos a 4000 x g.

• Para o ensaio, tomar 50 litros de supernatante por poço.

Nota: Fator de diluição: 10.

Camarão/Peixe/carne/Fígado/Rins

• A 1,0 g da amostra homogeneizada, adicionar 4,0 ml de tampão 1 × Ext.

• Vortex a amostra durante 1 minuto com misturador de vórtice.

• Centrifugar a amostra durante 5 minutos a 4.000 x g.

• Transferir cuidadosamente 200 uL da camada superior para um novo tubo,adicionar 1.375 mL de 1X diluente de amostra e 25 uL de tampão de equilíbrio de amostra, vórtice durante 30 segundos.

• Para o ensaio, utilizar 50 uL por poço.

Notas: Fator de diluição: 40.

Urina/sério

• Retirar 50 uL de amostra de urina ou soro, adicionar 1,2 ml de 1X diluente de amostra, misturar bem.

• Centrifugar durante 5 minutos a 4.000 x g.

• Retirar 50 uL do supernatante por poço para o ensaio.

Nota: Fator de diluição: 25.

Leite

• Adicionar 100 uL de amostra de leite a um tubo de centrífuga, adicionar 900 uL de 1X de diluente da amostra.
• Vortex vigorosamente durante 30 segundos.
• Centrifugar a 4.000 x g durante 10 minutos.
• Para o ensaio, utilizar 50 uL da amostra de supernatante.

Nota: Fator de diluição:10

Protocolo do Kit de Teste de KANAMYCIN ELISA

Preparação do reagente

IMPORTANTE: Todos os reagentes devem ser submetidos à temperatura ambiente antes da utilização (1 2 horas no20 ¢ 25°C / 68 ¢ 77°F); Certifique- se de ler a secção " Advertências e precauções "Página3.As soluções devem ser preparadas pouco antes do ensaio ELISA. Todos os reagentes devem ser misturados por inversão ou redemoinho suave antes da utilização. Preparar os volumes necessários para o número de poços em funcionamento.Não devolver os reagentes aos tubos/garrafas originaisO uso de reservatórios descartáveis ao manipular reagentes pode minimizar o risco de contaminação e é recomendado.

• Preparação da solução 1X de lavagem

Misturar 1 volume da solução de lavagem 20X com 19 volumes de água destilada.

Protocolo de ensaio ELISA

Marcar as tiras individuais que serão utilizadas e os reagentes aliquotados como exemplo:

• Adicionar 50 I.L. de cada um dos Standards de Canamicina em duplicado em poços diferentes (Adicionar os Standards à placa apenas na ordem de baixa concentração para alta concentração).

• Adicionar 50 litros de cada amostra em duplicado em poços de amostragem diferentes.

• Adicione 50 I.L. de HRP-Conjugated Ab#2 a cada poço e 50 I.L. de Anticorpo #1 de Kanamicina a cada poço.

• Incube o prato durante 30 minutos a temperatura ambiente (20 ¢ 25°C / 68 ¢ 77°F). (Evitar a luz solar direta e bancos frios durante a incubação (recomenda-se cobrir a placa de microtiter durante a incubação).

• Lave o prato 4 vezes com 250 I.L. de 1 X Solução de Lavar. Após a última lavagem, inverta o prato e bata suavemente o prato para secar em toalhas de papel (Faça o próximo passo imediatamente após a lavagem dos pratos.Não permitir que a chapa seque ao ar entre as etapas de trabalho).

• Adicione 100L de substrato de TMB. Tempo da reação imediatamente após a adição do substrato. Misture a solução balançando suavemente a placa manualmente por 30s enquanto incubaçãoQualquer solução de substrato que apresente coloração indica deterioração e deve ser descartada.Recomenda-se cobrir a placa de microtiter durante a incubação).

• Após incubação durante 15 minutos a temperatura ambiente (20 ¢ 25°C / 68 ¢ 77°F), adicionar 100 I.U. de tampão para parar a reacção enzimática.

• Leia a placa o mais rapidamente possível após a adição do tampão de parada num leitor de placas com comprimento de onda de 450 nm (Antes da leitura,utilizar uma toalha sem pêlos na parte inferior da placa para garantir que a umidade ou as impressões digitais não interferem com as leituras).

Cálculos da concentração de kanamicina

Uma curva padrão pode ser construída através do gráfico da absorção relativa média (%) obtida a partir de cada padrão de referência em relação à sua concentração em ng/mL numa curva logarítmica.

Absorção relativa (%) =padrão de absorção zeroou amostra x 100

Para determinar a concentração correspondente do medicamento testado em ng/mL a partir da curva padrão, utilizar os valores de absorção relativa média para cada amostra.

A figura a seguir é uma curva padrão típica do cloramfenicol.