A estreptomicina ELISA Test Kit do ™ de REAGEN é um immunoassay competitivo da enzima para a análise quantitativa da estreptomicina e do dihydrostreptomycin na alimentação, no mel, no rim, no fígado, na carne (carne, galinha e carne de porco), no leite, no soro e na urina.
Tipo da amostra |
Limite de detecção (ng/g ou ppb) |
Alimentação |
5 |
Mel |
2 |
Carne/fígado/rim |
5 |
Leite |
1 |
Pó de leite |
1 |
Soro/urina |
0,5 |
Analytes |
Reatividade cruzada (%) |
Estreptomicina |
100 |
Métodos reagente-livres rápidos (10 - 30 minutos), e orgânicos da extração para várias amostras com recuperação da elevação (75 - 115%).
Sensibilidade alta (0,05 ng/g ou ppb) e baixo limite de detecção (1 ng/g ou ppb para a carne e o leite).
Reprodutibilidade alta.
Um ensaio rápido de ELISA (menos de 2 horas apesar do número de amostras).
O método é baseado em um ensaio colorimetric competitivo de ELISA. O anticorpo da estreptomicina foi revestido nos poços da placa. Durante a análise, a amostra é adicionada junto com o conjugado da peroxidase do estreptomicina-armorácio. Se o resíduo da estreptomicina esta presente na amostra, competirá para o anticorpo da estreptomicina, desse modo impedindo que a estreptomicina-HRP ligue ao anticorpo unido ao poço. A intensidade resultante da cor, após a adição da carcaça de HRP (TMB), tem um relacionamento inverso com a concentração do resíduo da estreptomicina na amostra.
Etiquete as tiras individuais que serão usados e os reagentes da parte alíquota como o seguinte exemplo:
Componente |
Volume pela reação |
24 reações |
Anticorpo #1 da estreptomicina |
50 mL |
1,2 mL |
Anticorpo HRP-conjugado #2 |
50 mL |
1,2 mL |
solução da lavagem 1X |
2,0 mL |
48 mL |
Amortecedor da parada |
100 mL |
2,4 mL |
Carcaça de TMB |
100 mL |
2,4 mL |
Adicione 50uL de padrões de cada estreptomicina em duplicado em poços diferentes (F adiciona padrões para chapear somente na ordem da baixa concentração à concentração alta).
Adicione uL 50 de cada amostra em duplicado em poços diferentes da amostra.
Adicione uL 50 do anticorpo #2 HRP-Conjugar e 50mL o anticorpo #1 a cada poço, mistura bem delicadamente balançando a placa manualmente para 1 minuto.
Incube a placa por 30 minutos na temperatura ambiente (20 – 25°C/68 – 77°F) (o F evita a luz solar direta e partes superiores frias do banco durante a incubação. Cobrindo a placa de microtiter quando incubar for recomendada).
Lave a placa 5 vezes com o uL 250 da solução da lavagem 1X. Após a última lavagem, inverta a placa e bata delicadamente o seco de placa nas toalhas de papel (F executa o passo seguinte imediatamente depois das lavagens da placa. Não permita que a placa areje seco entre etapas de funcionamento).
Adicione uL 100 da carcaça de TMB. Cronometre a reação imediatamente depois de adicionar a carcaça. Misture a solução delicadamente balançando a placa manualmente para 1 minuto ao incubar (o F não põe nenhuma carcaça de volta ao recipiente original para evitar nenhuma contaminação potencial. Toda a solução da carcaça que exibe a coloração é indicativa da deterioração e deve ser rejeitada. Cobrindo a placa de microtiter quando incubar for recomendada).
Após a incubação por 15 minutos na temperatura ambiente (20 – 25°C/68 – 77°F), adicione uL 100 do amortecedor da parada para parar a reação de enzima.
Leia a placa que segue o mais cedo possível a adição de amortecedor da parada em um leitor da placa com o comprimento de onda de 450 nanômetro (F antes da leitura, usa uma limpeza sem fiapos na parte inferior da placa para se assegurar de que nenhuma umidade ou impressão digital interfira com as leituras).
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